ABSTRACT Feed additives, such as β-glucans, nucleotides, ascorbic acid (vitamin C), and α-tocopherol (vitamin E) can improve fish immunity and contribute to enhanced zootechnical performance of the fish. This study aimed to evaluate the effect of different concentrations of vitamin- mineral premix with or without the inclusion of an immunostimulant boost (β-glucans, nucleotides and vitamins C and E) on the zootechnical performance, hemato-immunological parameters, histological changes, and survival of Nile tilapia juveniles. To this end, isocaloric and isoproteic diets were prepared with three different concentrations of vitamin-mineral premix (1.0, 1.5, and 2.0 kg ton-1); additionally, the effects of 4% immunostimulant boost in the diet were examined considering six diets (without the immunostimulant boost: 0.1%, 0.15%, and 0.2%, and with the immunostimulant boost: 0.1% I, 0.15% I, and 0.2% I). We used 24 experimental units, each including 15 fish. Nile tilapia juveniles (1.88 g±0.25) were fed for 50 d with supplemented diets. Further, zootechnical indexes; histological changes in the liver, spleen, and intestine; intestinal morphology; and hemato-immunological parameters were evaluated. The fish that received supplementation showed higher zootechnical values, compared to those that did not receive the supplementation of immunostimulant reinforcement. Weight gain (30.45g±3.06), daily weight gain (0.60g±0.06), final weight (32.41g±3.15) and feed conversion (0.95±0.06) were higher in tilapia fed with an inclusion concentration of 0.2%. Hematological parameters were not affected by either the pre-mix concentrations or the booster of the immunostimulant. There was an increase in the number of intestinal folds, length of the fold, total area and number of goblet cells in the group supplemented with immunostimulant reinforcement. Supplementation with the immunostimulant promoted growth and improved intestinal morphology and immunological parameters of Nile tilapia juveniles.

RESUMO Os aditivos alimentares, tais como β-glucanos, nucleotídeos, ácido ascórbico (vitamina C) e α-tocoferol (vitamina E), podem melhorar a imunidade dos peixes e contribuir para um melhor desempenho zootécnico. Este estudo teve como objetivo avaliar o efeito de diferentes concentrações de premix vitamínico mineral com ou sem a inclusão de um imunoestimulante (β-glucanos, nucleotídeos e vitaminas C e E) no desempenho zootécnico, nos parâmetros hematoimunológicos, nas alterações histológicas e na sobrevivência dos juvenis de tilápia-do-Nilo. Para esse fim, foram preparadas dietas isocalóricas e isoproteicas com três concentrações diferentes de premix vitamínico e mineral (1,0, 1,5, e 2,0kg ton-1); além disso, foram examinados os efeitos da inclusão de 4% de imunoestimulante na dieta, considerando-se seis dietas (sem o imunoestimulante: 0,1%, 0,15% e 0,2%, e com a inclusão de imunoestimulante: 0,1% I, 0,15% I e 0,2% I). Foram utilizadas 24 unidades experimentais, cada uma com 15 peixes. Os juvenis de tilápia-do-Nilo (1,88g±0,25) foram alimentados, durante 50 dias, com as dietas suplementadas. Além disso, foram avaliados índices zootécnicos; alterações histológicas no fígado, baço e intestino; morfologia intestinal; e parâmetros hematoimunológicos. Os peixes que receberam suplementação apresentaram valores zootécnicos mais elevados, em comparação aos que não receberam a suplementação de reforço imunoestimulante. O ganho de peso (30,45g±3,06), o ganho de peso diário (0,60g ± 0,06), o peso final (32,41g±3,15) e a conversão alimentar (0,95±0,06) foram maiores nas tilápias alimentadas com uma concentração de inclusão de 0,2%. Os parâmetros hematológicos não foram afetados nem pelas concentrações de premix nem pelo reforço do imunoestimulante. Foi observado o aumento no número de pregas intestinais, no comprimento da prega, na área total e no número de células caliciformes no grupo suplementado com o boost imunoestimulante. A suplementação com o imunoestimulante promoveu o crescimento e melhorou a morfologia intestinal e os parâmetros imunológicos de juvenis de tilápia-do-Nilo.

RESUMO A fitoterapia é uma alternativa ao uso de agentes químicos contra infecções por parasitos monogenéticos. Este estudo avaliou a atividade anti-helmíntica do óleo essencial Ocimum gratissimum contra o monogenea Cichlidogyrus tilapiae , bem como sua toxicidade aguda e histopatologia em juvenis de tilápias. Foram avaliadas a concentração letal média (CL50) e diferentes concentrações de óleo essencial, tanto in vitro como in vivo (banho de curta e longa duração). A CL50 foi de 40,70mg.L-1; no ensaio in vitro, essa concentração apresentou 80% de eficácia, e no ensaio in vivo 65,87% de eficácia em banho de exposição crônica. No entanto, provocou alterações morfológicas nas brânquias, como hiperplasia e edema. A exposição dos parasitas na concentração mais elevada (320mg.L-1) mostrou 100% de mortalidade após duas horas de exposição no ensaio in vitro, enquanto no ensaio in vivo, em banho de curta duração de cinco minutos, durante três dias consecutivos, apresentou uma eficácia de 87,71%, sem danos às brânquias. Esses resultados demonstraram a atividade anti-helmíntica do óleo essencial de O. gratissimum e a concentração de segurança para uso na tilápia-do-nilo em banhos de curta duração.

ABSTRACT The phythotherapy is an alternative to use of chemotherapeutical agents against monogenean infection. This study evaluated the anthelmintic activity of essential oil Ocimum gratissimum against monogenean Cichlidogyrus tilapiae as well as its acute toxicity in tilapia juveniles. The mean lethal concentration (LC50) and different concentrations of the essential oil, both in vitro and in vivo assays (short and long-term baths) were assessed. The LC50 was 40.70mg.L-1 and in the in vitro assay this concentration showed 80% efficacy at the last two hours and in the in vivo assay 65.87% efficacy in long-term bath. However, it provoked morphological alterations on the gills such as hyperplasia and edema. The parasites exposure at the highest concentration (320mg.L-1) showed 100% mortality after 2h exposure in the in vitro assay, whereas in the in vivo assay, short-term baths of 5min for 3 consecutive days showed an efficacy of 87.71% without gills damage. These results demonstrate the anthelminthic activity of essential oil O. gratissimum and the safety concentration to use in Nile tilapia.

Avaliou-se a ocorrência de cestóides proteocefalídeos em tucunaré Cichla sp., capturados mensalmente, entre agosto de 2000 e agosto de 2001, no rio Paraná, em Presidente Epitácio, SP. Um total de 128 espécimes foram analisados, dos quais 71 (55,6%) estavam parasitados por Proteocephalus macrophallus (Diesing, 1850) e/ou P. microscopicus (Woodland, 1935). A abundância e intensidade média total foram de 157,08 e 223,41, respectivamente. A maior prevalência (90%), juntamente com os maiores índices de abundância (1122,4) e intensidade média (1247,11) ocorreram no mês de fevereiro 2001, enquanto no mês de setembro 2000 não foram observados animais parasitados por cestóides. Não houve relação entre o sexo do hospedeiro e os índices parasitológicos.

The occurrence of proteocephalid cestodes in tucunaré Cichla sp., captured monthly, between August 2000 and August 2001, in Paraná River, Presidente Epitácio, SP, was evaluated. From 128 specimens, 71 (55.6%) were parasitized by Proteocephalus macrophallus (Diesing, 1850) and/or P. microscopicus (Woodland, 1935). Total mean abundance and intensity were 157.08 and 223.41, respectively. The highest prevalence (90%) mean abundance (1,122.4) and intensity indexes (1,247.11) occurred in February 2001, while in September 2000 there were no observed animals infected by cestodes. No relationship between the sex of the host and parasitological indexes was found.

Avaliou-se o efeito de uma dieta suplementada com Lactobacillus plantarum na engorda de Litopenaeus vannamei sobre a microbiota bacteriana do trato digestivo, a sobrevivência e alguns parâmetros hematoimunológicos após desafio com Vibrio harveyi. Não foi observada diferença significativa na sobrevivência (80±6%) e no peso final dos camarões (6,63±0,56g) durante a engorda (60 dias). A população de bactérias totais e Vibrio spp. no intestino não diferiu até o 40° dia de cultivo, mas foi inferior nos camarões alimentados com dieta suplementada com probiótico no 60° dia de cultivo. A população de bactérias lácticas foi superior no intestino de camarões alimentados com dieta suplementada com probióticos após o 20° dia de cultivo. Dez horas após o desafio, a sobrevivência dos camarões alimentados com dieta suplementada com probiótico foi superior (65,7±2,9%) a dos camarões do controle (39,9±4,4%). Camarões alimentados com dieta suplementada com probióticos e desafiados com V. harveyi apresentaram menor contagem de bactérias na hemolinfa e hepatopâncreas. A contagem total de hemócitos e a atividade aglutinante da hemolinfa foram superiores nos camarões inoculados com V. harveyi alimentados com dieta suplementada com probióticos. A suplementação da dieta com probióticos modifica a microbiota bacteriana intestinal dos camarões aumentando sua resistência ao desafio com V. harveyi.

The effect of a Lactobacillus plantarum-supplemented diet on shrimp growth, digestive tract bacterial microbiota, survival, and some hemato-immunological parameters after an experimental challenge with Vibrio harveyi was studied. No difference (P>0.05) was observed in shrimp survival (80±6%) and final weight (6.63±0.56g) after 60 days feeding trial. Total bacteria count and Vibrio spp. count in the digestive tract were not diferent (P>0.05) until day 40, but they were lower (P<0.05) in the probiotic-supplemented group on day 60. Total lactic bacteria in the shrimp digestive tract was higher after day 20 in the probiotic-supplemented group. Ten hours after V. harveyi challenge, survival of the probiotic-supplemented group (65.7±2.9%) was higher (P>0.05) than the control group (39.9±4.4%). Bacterial counts in hemolymph and hepatopancreas was lower (P<0.05) in the probiotic-supplemented group than in the control group after V. harveyi challenge. Total hemocyte count and serum agglutination activity were higher (P>0.05) in the probiotic-supplemented group after challenge with V. harveyi. Probiotic-supplemented diet modifies shrimp digestive tract bacterial microbiota, increasing resistance to V. harveyi infection.

Pacus Piaractus mesopotamicus alimentados com dietas contendo três níveis de vitaminas C e E (zero, 250 e 500mg/kg de ração) foram desafiados, em diferentes temperaturas, com Aeromonas hydrophila. Os peixes foram mantidos em caixas plásticas de 300L e, com o objetivo de reduzir as reservas vitamínicas, durante os primeiros 60 dias, foram alimentados com dietas isentas das vitaminas C e E. Após esse período, os peixes foram estocados na densidade inicial de 14 peixes/caixa e as dietas-teste foram oferecidas durante 60 dias. Ao final do experimento, todos os peixes foram infectados com 6×10(6) UFC de A. hydrophila/peixe, injetada intraperitonealmente. Não houve interação nível de vitamina C vs. nível de vitamina E quanto à mortalidade. A suplementação com as vitaminas C e E não reduziu a taxa de mortalidade dos peixes desafiados com A. hydrophila. Independentemente da suplementação vitamínica, após o desafio, os peixes menores apresentaram maior taxa de mortalidade que os maiores e o grupo mantido em ambiente com temperatura mais alta apresentou maior taxa de mortalidade após o desafio.

Pacu Piaractus mesopotamicus fed diets supplemented with three vitamins C and E levels (zero, 250, and 500mg vitamin/kg diet) were challenged with Aeromonas hydrophila under different temperatures. Fish were kept in 300L plastic tanks and fed during the first 60 days with diets without vitamins C and E, in an attempt to reduce vitamin sources. After this period, fish were maintained at an initial density of 14 fish/tank and test diets were offered during 60 days. At the end of the experiment, all fish were infected with 6×10(6)CFU of A. hydrophila/fish, intraperitoneally injected. No interaction of dietary levels of vitamin C vs. E on mortality was observed. Supplementation with vitamins C and E did not decrease the mortality rate of fish challenged with A. hydrophila. Regardless of vitamin supplementation, after challenge, smaller fish showed higher mortality than larger ones and the fish group maintained in an environment under higher temperatures showed higher mortality rate.

Investigou-se a relação entre as características da água e a infestação de protozoários parasitos, Icthyophthirius multifiliis e Trichodina sp., em peixe espada, Xiphophorus helleri e em plati, Xiphophorus maculatus, coletados em uma piscicultura de peixes ornamentais no Estado de São Paulo, Brasil. Os peixes foram coletados mensalmente, durante um ano, dos viveiros e das caixas de estocagem. A prevalência da infestação nos peixes das caixas e dos viveiros foram, respectivamente, 34,2% e 22,5% para I. multifiliis e 13% e 54% para Trichodina sp. A elevada condutividade elétrica e o pH da água reduziram a infestação por I. multifiliis. A baixa concentração de oxigênio resultou em aumento na infestação por Trichodina sp. O uso do sal, para aumentar a condutividade elétrica da água, consistiu em um método de controle de I. multifiliis. A redução do oxigênio dissolvido e a adição de fertilizante orgânico favoreceram a reprodução de Trichodina sp.

This work investigated the relationship between water characteristics and infestation of protozoan parasites, Icthyophthirius multifiliis and Trichodina sp., in swordtails (Xiphophorus helleri) and platy (Xiphophorus maculates) collected in an ornamental fish farm in São Paulo, Brazil. Fish were monthly collected from ponds and tanks for one year. The prevalence rates in fish from tanks and ponds were, respectively, 34.2% and 22.5% for I. multifiliis, and 13% and 54.2% for Trichodina sp. Increased electric conductivity and pH provoked reduction of I. multifiliis infestation. Low oxygen concentration increased Trichodina sp. infestation. The use of salt to increase the electric conductivity of water was a method to control I. multifiliis. Low dissolved oxygen and the addition of organic fertilizer favored the reproduction of Trichodina sp.

Descreve-se Camallanus maculatus n. sp. (Nematoda: Camallanidae) em Xiphophorus maculatus (Osteichthyes: Poecilidae) capturado em uma piscicultura ornamental no estado de São Paulo. De 40 peixes examinados, 33 estavam parasitados (prevalência de 82%) cuja intensidade média foi de 2,8 (1-20). Os machos apresentaram 3.500µm e as fêmeas com 7,100µm de comprimento total, providos de uma cápsula bucal laranja-castanho e dois tridentes. Observaram-se machos com espículos desiguais, gubernáculo ausente e fêmeas com vulva situada na metade do corpo. As principais características foram as estrias longitudinais lisas em cada valva da cápsula bucal em ambos os sexos, o espículo menor com alargamento na extremidade anterior, o número de papilas genitais, as porções muscular e glandular do esôfago longas e a cauda longa e arredondada na fêmea.

The present study describes Camallanus maculatus n. sp. (Nematoda: Camallanidae) from Xiphophorus maculatus (Osteichthyes: Poecilidae) collected in an ornamental fish farm in São Paulo State, Brazil. Thirty-three out of 40 examined fish were parasitized (82% prevalence) with mean intensity of 2.8 (1-20). Male specimens were 3,500µm total length and females 7,100µm total length, provided with orange-brown buccal capsule and two developed tridents. Males showed two unequal spicules, gubernaculum absent and females with vulva situated in the middle of the body. The main characteristics were the sleekly longitudinal ridges in the buccal capsule in both sexes, enlargement at the anterior end of the smaller spicule, the number of genital papillae, longer muscular and glandular portion of esophagus and round tail in female.

A viabilidade da infecção experimental com larvas do nematóide Camallanus sp. em Notodiaptomus sp., crustáceo com potencial para hospedeiro intermediário foi avaliada. Fêmeas adultas do nematóide foram extraídas de Xiphophorus maculatus (Osteichthyes: Poeciliidae), provenientes de piscicultura de peixes ornamentais no estado de São Paulo. As fêmeas foram ligeiramente pressionadas para liberar as larvas, coletadas com pipeta Pasteur e separadas em placas de Petri contendo 9ml de água filtrada a 28,1ºC do próprio cultivo de zooplâncton. Os tratamentos consistiram de placas contendo 60 e 105 copépodes onde se adicionou 120, 150 e 210 larvas de nematóides em quatro repetições. Nos tempos de 24 e 36h após a exposição às larvas, os copépodes foram fixados em álcool 70% para quantificação de larvas. Após 24h de exposição, o grupo com 60 copépodes na presença de 120 larvas apresentou maior prevalência (46,5%) do que 105 copépodes com 120 larvas (33,2%). Sugere-se que 120 larvas foram suficientes para o sucesso da infecção. A infecção experimental mostrou-se viável, servindo de modelo para o estudo do ciclo de vida de camalanídeos e testes de susceptibilidade de hospedeiros.

This trial registered the experimental infection viability with nematode larvae Camallanus sp. in Notodiaptomus sp., a crustacean, which can be an intermediate host. Adult females of nematode were dissected from the intestines of Xiphophorus maculatus (Osteichthyes: Poeciliidae), at a fish farm in the State of São Paulo. Females were slightly compressed for larvae release, collected with Pasteur pipette and separated on Petri dishes with 9ml filtered water at 28.1ºC, from zooplankton culture. Treatments consisted of Petri dishes with 60 and 105 copepods, in which 120, 150 and 210 larvae of nematode were added in four replications. Twenty-four and 36h after exposition to the larvae, the copepods were fixed in 70% alcohol to record the amount of fixed larvae. Twenty four hours after exposition, 60 copepods group with 120 larvae showed significantly higher prevalence (46.5%) when compared to 105 copepods and 120 larvae (33.2%). Thus, these answers suggested that 120 larvae were enough for a successful infectivity. Experimental infection was available and so, it was used as a pattern to life cycle studies of camallanid nematodes and hosts susceptibility tests.

Estudou-se efeito da infecção por Goezia leporini Martins & Yoshitoshi, 2003 (Nematoda: Anisakidae) sobre as características hematológicas de Leporinus macrocephalus (Osteichthyes:Anostomidae) cultivado. Palidez das brânquias, rins, fígado e coração, pontos negros nos rins e acúmulo de líquido na cavidade visceral, estômago e intestinos foram observados. O conteúdo da vesícula biliar tinha aparência pálida e translúcida. Observaram-se alta e moderada correlações positivas entre número de nematóides e peso do peixe estimadas dentro dos grupos de peixe de 0-100g e 100-200g, respectivamente. As extensões sangüíneas revelaram variações no tamanho (anisocitose) e forma (poiquilocitose) dos eritrócitos, bem como eritrócitos em divisão. Não houve alteração (P>0,05) na contagem total de eritrócitos, de leucócitos, na taxa de hemoglobina e nos percentuais de trombócitos e monócitos. A infecção provocou redução (P<0,05) no percentual de hematócrito, no volume corpuscular médio, na concentração de hemoglobina corpuscular média e no percentual de linfócitos, e aumento (P<0,05) no percentual de neutrófilos e eosinófilos no sangue circulante de peixes infectados. Este é o primeiro relato no Brasil que relaciona hematologia e infecção por nematóides em peixes cultivados.

The effect of Goezia leporini Martins & Yoshitoshi, 2003 (Nematoda: Anisakidae) infection on the haematological characteristics of cultivated Leporinus macrocephalus (Osteichthyes:Anostomidae) was studied. Paleness of gills, kidneys, liver and heart, black spots on the kidney and accumulation of fluid in the visceral cavity, stomach and intestines were observed. Gall bladder content had pale and translucent aspect. Strong and slight positive correlations between number of nematodes and fish weight were estimated within the 0-100g and 100-200g fish weight group, respectively. Blood smears from infected fish showed variation in erythrocyte size (anisocytosis) and shape (poikilocytosis), and also dividing erythrocytes. No significant alteration (P>0.05) was shown as to erythrocyte, leukocyte count, haemoglobin concentration and thrombocyte and monocyte percentage. Parasite infection provoked significant reduction (P<0.05) in hematocrit, mean corpuscular volume, mean corpuscular haemoglobin concentration and lymphocyte percentage. On the other hand, significant increase (P<0.05) in neutrophil and eosinophil percentage in circulating blood of infected fish was observed. This is the first report regarding haematology of nematode infected freshwater cultivated fish in Brazil.

Sixty Piaractus mesopotamicus Holmberg, 1887 (pacu) fry fed a diet containing 0, 50, 100 and 200 mg ascorbic acid/kg dry feed were studied to evaluate the effect on parasitic infestation by the monogenean Anacanthorus penilabiatus Boeger, Husak and Martins, 1995 (Monogenea: Dactylogyridae) for a period of 24 weeks. The temperature of the aquaria was measured daily and remained between 28 and 31oC. At the beginning of the experiment, fish showed 6.15 ± 0.33 cm standard length and 8.64 ± 1.62 g average body weight. A sample of fish was examined and showed 43 ± 17 monogeneans per fish. At the end of the experiment, the gills of control and vitamin C-treated fish were collected for parasite counts. Control fish had 42.5 parasites per fish, a significantly higher number (P<0.05) when compared with fish fed vitamin C, that showed 16.5 parasites per fish. Ascorbic acid fortification in the food promoted an increase in fish resistance to parasites. It is suggested that an optimum level of 139 mg/kg vitamin C supplementation either elicited better nutritional conditions by stimulating the appetite of the fish or improved the immune response.